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首頁天恒動態(tài) 熒光定量分析PCR技術(shù)的特點

熒光定量分析PCR技術(shù)的特點

2015年11月19日09:58 

PCR技術(shù)的優(yōu)點

1.操作簡便

應(yīng)用PCR方法的早期階段操作縈瑣,因為使用的聚合醉是大腸桿菌DNA聚合酶I的大片段,即Klenow片段,而不是耐高溫的TaqDNA聚合酶,而且操作也未實現(xiàn)自動化。目前使用的是耐高溫的TaqDNA聚合酶,其操作也實行了電腦控制的DN八擴增儀的自動化,只要將擴增反應(yīng)所需要的特定程序輸入DNA自動擴增儀,操作臺PCR操作箱把反應(yīng)所需要的全部材料混合均勻,置入儀器內(nèi),反應(yīng)就會按照所輸入的正確程序進行。如果需要,還可隨時予以調(diào)整。

2. 省時

應(yīng)用TaqDNA聚合酶時,單核昔酸摻入的速率較高,75℃一80℃時,每個酶分子每秒鐘可完成150個核昔合成.PCR每一周期需數(shù)分種,所以,一般取用20一30個周期能使目的DNA達到數(shù)百萬倍擴增的反應(yīng)只需數(shù)小時即可完成.在基因分離,突變體構(gòu)建,DNA測序等方面,PCR方法均較之常規(guī)方法快速得多.例如,乾蕓GENIN PCRroom-1st操作臺PCR操作箱用常規(guī)方法建立cDNA文庫或染色體DNA文庫來分離基因,需花幾個月時間,用PCR方法只要1一2個周;用M13法構(gòu)建突變體需l一2個月,用PCR法僅用數(shù)天;PCR方法擴增的目的DN段可直接用作測序分析,較常用的通過克隆,培養(yǎng)擴增,純化制備等步驟獲得測序片段更為簡便,省時。

3.靈教度高

PCR產(chǎn)物的生成,是以指數(shù)方式增加的,所以欲擴增pg量級的起始物到雌水平成放大真核細(xì)胞單拷貝基因,通過PCR方法都是不難完成的。PCR方法還可用單一雙倍體細(xì)胞,一根頭發(fā),甚至單一精子進行DNA定型。

4.特異性強

作為引物的寡聚核昔酸與模板結(jié)合的正確性是決定反應(yīng)產(chǎn)物是否特異的關(guān)鍵。TaqDNA聚合酶耐高溫的性質(zhì),使得反應(yīng)中引物與模板退火的步驟可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的目的DN段也能保持很高的正確程度。

5.對原始材料質(zhì)t要求低

由于PCR技術(shù)有高靈敏度和強特異性,故僅含量(Pg,ng水平)的目的DNA的粗制品或者總DNA,就可以作為反應(yīng)起始材料來獲取目的DNA擴增產(chǎn)物。部分的降解的DNA材料也可以通過PCR多次反應(yīng)周期,最終得到所需的含全長序列的DN段.用石蠟包埋的組織切片,甚至幾千年前出土的文物,只需經(jīng)過適當(dāng)?shù)奶幚恚|GENIN PCRroom-1st操作臺PCR操作箱都可用PCR技術(shù)進行目的DNA的擴增,這樣就有可能對系統(tǒng)保存的病理材料進行檢測,解決以前無法解決的問題,同時,這一特性也使PCR技術(shù)應(yīng)用到考古學(xué),人類學(xué)等領(lǐng)域成為可能。

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